PH2062 | 10×CAS检测液10x CAS detection solution

产品说明：

CAS（Chrome azurol S）检测液是由铬天青（chrome azurol sulphonate, CAS）、溴化十六烷基三甲铵 （hexadecy- ltrimethyl-ammonium bromide, HDTMA）和铁离子组成的一种复合物，呈亮蓝色。当蓝色检测平板中的铁离子被微生物分泌的嗜铁素夺走时，CAS检测液由蓝色变成橘黄色，因此CAS液体培养基可用于微生物产嗜铁素的检测。

保存条件：常温运输与保存，有效期12个月。

注：

1. 此产品已经过无菌处理，可以作为CAS培养基的配套产品。

2. 可以单独用于检测微生物产嗜铁素的检测。

3. 使用浓度，可根据实验需要稀释后使用。

4. 不建议与M9培养基搭配使用。

使用方法（仅供参考）：

一、产嗜铁素菌株筛选

方法一：液体培养基筛选

将适量待测菌接种于液体培养基（不加CAS检测液），28°C、180 r/min摇床培养，细菌培养2-3 d，真菌培养5-7 d（菌的生长速度与培养基种类有关，请根据菌实际生长情况进行培养），取适量菌液10000 r/min 离心10 min，取 3 mL 上清液和2×CAS检测液（10×CAS检测液与水1:4混合）等体积混合，黑暗中静置30 min，培养基变为黄色即为产嗜铁素菌株。

方法二：固体培养基筛选

将适量待测菌接种于CAS固体培养基上，菌株周围有黄色晕圈即为嗜铁素菌株。

二、嗜铁素相对含量测定

取适量产嗜铁素菌株的菌液10000 r/min离心10 min，取3 mL上清液和2×CAS检测液等体积混合（如果培养基中含有CAS检测液，可省略此步骤，直接测定），黑暗中静置30 min，测 630 nm处的吸光值(As)，以双蒸水为对照调零。另取空白CAS液体培养基（未接菌的液体培养基与2×CAS检测液等体积混匀），以其吸光值作参比值(Ar)，据根公式[(Ar-As)/Ar] × 100%计算，即得嗜铁素的相对含量。（注意：关于对照组，不同文献的描述差异较大，此方法仅供参考）

注意事项：

1. 注意无菌操作，避免微生物污染。

2. 该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其它用途。

3. 开封后根据存放条件的不同保质时间存在一定的差异。

常见问题

1. CAS培养基配制出的不是蓝色怎么办？

答：原因一，培养基灭菌后颜色偏深导致与CAS检测液混合后不呈现蓝色（偏绿）。解决方法，灭菌条件必须115 ℃ 20 min，灭菌后应及时拿出（灭菌后，灭菌锅内短时间会处于高温），灭菌锅内不宜放太满（升降温速度慢）。原因二，配制培养基的瓶子中金属离子和蛋白的残留影响显色，把瓶子仔细刷一刷，最后用去离子水冲洗（必要时可选择酸洗）。

2. 液体培养基培养的菌液于CAS检测液混合后有絮状物或者沉淀怎么办？

答：原因一，微生物产嗜铁素的量过高。解决方法一，减少菌培养时间或减少培养基接菌量。解决方法二，将待测菌液与CAS检测液混合时，增加CAS检测液的体积比例。注意：实验组与对照组需平行处理。原因二，配制培养基的瓶子中金属离子和蛋白的残留或者水质等影响，需要仔细刷瓶子并用去离子水冲洗（必要时可选择酸洗）或者更换水。

3．待测菌株在CAS培养基上生长缓慢怎么办？

答: 可采用双层平板法。下层平板为10 mL水琼脂（每900 mL蒸馏水中添加15-20 g琼脂和100 mL 10×CAS检测液），上层平板为10 mL基础培养基（根据实验需求选择培养基，注意需要加琼脂）。下层水琼脂凝固后，再倾倒基础培养基即可。

4. CAS检测液可以与哪些培养基搭配使用？

答：如MSA和MKB培养基。不建议与M9培养基搭配使用，M9培养基与CAS检测液混合后呈现黄色。LB培养基也不适用，LB是富营养培养基，不利于菌产嗜铁素。