PH0516 | 苏木素伊红(HE)染色试剂盒 Haematoxylin Eosin (H&E) staining

货号 PH0516

名称 苏木素伊红(HE)染色试剂盒 / Haematoxylin Eosin (H&E) staining

规格 2×100mL | 2×500mL

存储 室温避光保存，有效期至少12个月

自备材料：

1、盐酸乙醇分化液
2、蓝化液（如稀氨水、碳酸锂溶液等）
3、系列乙醇
4、4%的多聚甲醛 (Cat#: PH0427)

产品简介

苏木精-伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，简称 HE 染色法 ，是病理学常规制片中最基本的染色方法。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。

染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。

染色原理：

1、 细胞核染色的原理：  苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、 细胞浆染色的原理：  伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染液的pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、 分化作用：  染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

4、 返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，故分化之后，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

使用方法

操作步骤（仅供参考）：

（一） 石蜡切片染色

1、 切片脱蜡至水

①二甲苯作用2次，每次5～10min。 
②（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。                       
③95%的乙醇 3～5min
④90%的乙醇 3～5min
⑤80%的乙醇 3～5min
⑥自来水或蒸馏水冲洗 1～3min

2、染色

①苏木素染色液染色 5～8min (具体时间根据染色结果和实验要求调整)
②自来水或蒸馏水冲洗 5～10s
③盐酸乙醇分化（可选） 2～5s
④自来水冲洗 20～30s
⑤蓝化液返蓝 20～40s
⑥自来水冲洗 30～60s
⑦伊红染色液染色 3～5min (具体时间根据染色结果和实验要求调整)
⑧自来水冲洗 1～5s

2、脱水、透明、封固

①80%乙醇 10～20s 
②90%乙醇 10～20s
③95%乙醇作用2次，每次1～2min。
④无水乙醇作用2次，每次2～3min。
⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。
⑥中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

 
（二） 冰冻切片染色

冰冻切片不用脱蜡，可固定后直接染色，其方法与石蜡切片相同。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

 
（三） 细胞染色

1、4%的多聚甲醛固定10～20min。
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、 蒸馏水冲洗2次，每次2min。 
4、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间相应缩短。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、纤维呈红色。

注意事项

1、 切片脱蜡应尽量干净。
2、 95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇应经常更换新液。
3、 盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
4、 染色过程推荐浅染，通常只需能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞质颜色。
5、 冷冻切片染色时间尽量要短。
6、 蓝化液常使用0.2～1%氨水水溶液或Scoot促蓝液或0.1～1%碳酸锂水溶液。
7、第一次使用本试剂盒时建议先取1-2个样品做预实验。
8、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 Hematoxylin and eosin stain or haematoxylin and eosin stain (H&E stain or HE stain) is one of the principal stains in histology. It is the most widely used stain in medical diagnosis and is often the gold standard (for example, when a pathologist looks at a biopsy of a suspected cancer, the histological section is likely to be stained with H&E). A combination of hematoxylin and eosin, it produces blues, violets, and reds.