原产于中国PH0325 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit

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产品名称 : PH0325 | Bradford蛋白浓度测定试剂盒 Bradford Protein Assay Kit
产品品牌 : 飞净 PHYGENE

 

产品简介

考马斯亮兰 G-250 染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由 465nm  595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值 A595 与蛋白质浓度成正比。Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙*醇的浓度可高达 1M,二硫苏糖醇的浓度可高达 5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保 SDS的浓度低于 0.1%Triton X-100 低于 0.1%Tween 20, 60, 80 低于 0.06%含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒。

 

Components

500T

1000T

2500T

Storage

5×G250 染色液

25mL

50mL

100mL

2-8℃

PBS 稀释液

30mL

30mL

30mL

2-8℃

蛋白标准(5mg/ml BSA)

1mL

1mL

1mL

-20℃

 

 

操作说明

 

一.微孔酶标仪法

 

1. 完全溶解蛋白标准品,取 10μL,稀释至 250μL ,使终浓度为 0.2mg/ml待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用 0.9%NaCl PBS 稀释标准品。

 

2. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀,取 1ml 5×G250 染色液,加入 4ml 双蒸水,混匀成 1×G250染色液,此 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

 

3. 将标准品按 0,2,4,6,8,12,16,20 微升分别加到 96 孔板中,加 PBS 稀释液补足到 20 微升。

 

4. 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作 倍、倍、倍稀释),加 20 微升到 96 孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线 1/2后。

 

5. 各孔加入 200 微升稀释后的 1×G250 染色液,室温放置 3-5 分钟。

 

6. 用酶标仪测定 A595,或 560-610nm 之间的其它波长的吸光度。

 

7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。

 

二.分光光度计法

 

如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。步骤如下:

1. 取八支(或者更多)干净的 10ml 离心管,标记上号。

2. 取 100μLBSA 加入 PBS 2.4ml 稀释至终浓度为 0.2mg/ml

3. 5×G250 染色液使用前请颠倒 3-5 次混匀,取 10ml 5×G250 染色液,加入 40ml 双蒸水,混匀成 1×G250 染色液 1×G250 染色液可在 4℃保存一周。

4. 按下表加入试剂(以每孔 5ml 计,多余的用来清洗比色皿)

 

离心管号

1

2

3

4

5

6

7(样品管1)

8(样品管2)

9(样品管 3)

标准品

0μL

100μL

200μL

300μL

400μL

500μL

500μL适当稀释的样品1

500μL适当稀释的样品2

……

稀释液(PBS

500μL

400μL

300μL

200μL

100μL

0

0

0

0

1×G250

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml


 5. 反应 分钟后测 OD 值。为了实验的准确性,可每间隔 分钟加一管染色液,每间隔 分钟测一管 OD 值。

如下表:


离心管号

1

2

3

4

5

6

7

8

……

加染色剂(分钟)

0

2

4

6

8

10

12

14

……

OD值(分钟)

3

5

7

9

11

13

15

17

……

 

The Bradford Reagent can be used to determine the concentration of proteins in solution. The procedure is based on the formation of a complex between the dye, Brilliant Blue G, and proteins in solution. The proteindye complex causes a shift in the absorption maximum of the dye from 465 to 595 nm.

温馨提示:1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

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