PH0331 | SDS-PAGE凝胶制备试剂盒 (SDS-PAGE Gel Kit)

有效期：12个月
存储：常温运输，2-8 ℃保存, 一年有效！

产品简介

我们生产的 SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒提供了配制 SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制 PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒可用于配制 SDS-PAGE 凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。

本试剂盒约可配制 30-50 块常规大小的 PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

试剂组分


组分 规格 保存
30% Acr-Bis(29:1) 100mL 2-8℃，避光
1M Tris-HCl, pH8.8 100mL RT
1M Tris-HCl, pH6.8 15mL RT
APS（过硫酸铵干粉） 0.5g RT
10%SDS 5mL RT
TEMED 0.5mL 2-8℃，避光


产品保存
Tris-HCl,pH8.8、SDS、Ammonnium persulfate(过硫酸铵)和 Tris-HCl,pH6.8 室温保存。30% Acr-Bis(29:1)和 TEMED 2-8℃避光保存。过硫酸铵配制成 10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。


使用参考

一，取5支 1.5ml 离心管，将过硫酸铵干粉分装成 100mg/支，标记好备用。


二，凝胶制备：


1， 取一支称好的 100mg 过硫酸铵干粉，加入 1ml 蒸馏水，混匀，此配好的 10%过硫酸铵溶液 2-8℃可保存一周。洗干净电泳玻璃板，夹好。


2， 根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下附表配制。先配分离胶，再配浓缩胶。(可根据用量自行等比加减)


【注意】


1，TEMED 和 10%过硫酸铵最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵在 4℃有效期为一周(-20℃三个月)，TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶 30 分钟内可以凝固，如温度过低，可放 37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加 1ml ddH2O 封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前，先倾去水层，再用吸纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。


2，配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同，可自行调整，主要是调整 30%丙烯酰胺的量（需要浓度×总体积/30%），最后用水补足总体积。


三，上样，电泳，一般是浓缩胶 80V，分离胶 120V 恒压，等溴酚兰电泳到合适的位置，结束电泳，染色或者进行下一步实验。


注意事项
1）过硫酸铵配制成 10%溶液后，应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。
2）TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
3）另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。


附表： 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度 最佳分离范围
6%胶 50-150kD
8%胶 30-90kD
10%胶 20-80kD
12%胶 12-60kD
15%胶 10-40kD


成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
6%胶 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
30%Acr-Bis(29:1) 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.004 0.008 0.012 0.016 0.024 0.04
成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
8%胶 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 1.7 3.3 5 6.7 10.0 16.7
30%Acr-Bis(29:1) 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.003 0.006 0.009 0.012 0.018 0.03
成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
10%胶 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 1.3 2.7 4.0 5.3 8.0 13.3
30%Acr-Bis(29:1) 1.7 3.3 5.0 6.7 10.0 16.7
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
12%胶 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 1.0 2.0 3.0 4.0 6.0 10.0
30%Acr-Bis(29:1) 2.0 4.0 6.0 8.0 12.0 20.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
成分 配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)
15%胶 5 10 15 20 30 50
蒸馏水 0.5 1.0 1.5 2.0 3.0 5.0
30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 15.0 25.0
1M Tris, pH8.8 1.9 3.8 5.7 7.6 11.4 19.0
10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
10%APS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.3 0.5
TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.012 0.02
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。


3.按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：
成分 配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
5%胶 2 3 4 6 8 10
蒸馏水 1.4 2.1 2.7 4.1 5.5 6.8
30%Acr-Bis(29:1) 0.33 0.5 0.67 1.0 1.3 1.7
1M Tris, pH6.8 0.25 0.38 0.5 0.75 1.0 1.25
10%SDS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
10%APS 0.02 0.03 0.04 0.06 0.08 0.1
TEMED 0.002 0.003 0.004 0.006 0.008 0.01


注：通常10-30分钟内胶会凝固。注：具体的凝固时间和温度及光照有关，说明书中10%APS和TEMED的正常推荐用量是室温为25℃时的推荐用量。为达到与25℃时相近的凝固时间，当室温低于25℃时，可以适当同时加大10%APS和TEMED的用量，例如20℃时建议用量是正常推荐用量的1.5倍，15℃时建议用量是正常推荐用量的2倍。