PH0502 | 0.25%胰蛋白酶溶液 胰酶细胞消化液（1×）不含EDTA / 0.25% Trypsin Solution without EDTA

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰脏产生没有活性的胰蛋白酶原分泌到小肠后，小肠内的肠肽酶会活化该酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特点在于已经活化的胰蛋白酶，能够继续活化更多胰蛋白酶原，这种过程即自动催化。胰蛋白酶在小肠工作，它会将蛋白质水解为肽，进而分解为氨基酸，其最适温度约为37℃。产品简介 

胰蛋白酶（Trypsin）简称胰酶，是一种丝氨酸水解酶，能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基端切断。在组织细胞的提取、培养，以及体外细胞培养过程中，均会使用到胰蛋白酶消化液，用于水解细胞间蛋白质，使组织或细胞离散成单个细胞。胰酶在37℃ pH 8.0条件下消化能力最强。常用胰酶工作浓度为0.25%。EDTA可以螯合钙镁离子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速细胞间连接蛋白的水解，起到增强消化的效果。酚红是一种pH指示剂，溶液偏碱性时呈紫红色，偏酸性时呈橘红色，近中性时呈粉红色。

存储 冰袋运输，-20℃保存，有效期18个月，建议分装冻存，避免反复冻融。

操作说明

贴壁细胞的消化：
1、吸去培养液，用无菌的pbs、hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清.
2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同.
3个、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化，或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来；此时吸除胰酶细胞消化液；加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验.
4、如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。
5个、如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000G离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。


组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。


注意事项 

1. 由于组织或细胞性质不同，实验人员应依据具体情况，确定最佳消化时间；消化细胞时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁和生长状况。

2. 本产品不含抑菌剂，在使用过程中要特别注意无菌操作，避免消化液被微生物污染。

3. 如含有酚红指示剂的消化液，可能会因某些原因导致pH略微下降，从而导致溶液颜色由红色变成橙色。该种橙色的溶液依然可以使用，或者也可采用无菌的2M NaOH溶液对pH进行微调后使用。

4. 本产品不宜4℃长期保存，避免反复冻融，建议分装成小份后-20℃保存。

5. 对于胰酶中EDTA、酚红的选择，可以根据实验需要，对于一般的肿瘤细胞，选择含EDTA的胰酶消化液。对于较敏感、脆弱的细胞，例如原代细胞及很容易消化的细胞，选择不含EDTA的胰酶消化液，如果细胞特别敏感，需要选择胰蛋白酶浓度更低的消化液。如果需要用于流式细胞仪检测细胞凋亡，则选用不含EDTA的胰酶消化液。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。