PH0213 | 全血基因组DNA提取试剂盒 Blood Genomic DNA Kit

本试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组 DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附 DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA 可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 

存储：本试剂盒在室温（25℃左右）干燥条件下，可保存 1 年；更长时间的保存可置于 2–8℃。2–8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，应在使用前置于 37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用。

使用参考

使用前请先在漂洗液和溶液 B 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1 、样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的0.lml-1ml 血液样品)：

a 、在血液样品中加入 2-3 倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，12000rpm 离心 1min，小心吸去上清，沉淀应为白色或淡红色，如果裂解不彻底，可重复以上述步骤一次。向沉淀中加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。
b 、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量为 5-20ul ，不需要再用红细胞裂解液处理，直接加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。

2 、向悬浮液中加入 20ul (10mg/ml) 的 RNase A，充分颠倒混匀，室温放置 10min 。

3 、加入 20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶 K，充分颠倒混匀，65℃水浴消化 30-60min ，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。

4 、加入 2 倍体积溶液 B(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。

5 、12000rpm 离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

6 、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7 、向吸附柱中加入 500ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8 、12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

9 、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置 5min，12000rpm 离心 1min。

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。


注意事项

1、本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2 -8℃。
2、常用的血液抗凝剂有 EDTA、ACD 和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组 DNA，可优先考虑使用 ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组 DNA 进行 PCR 扩增时，有 PCR 扩增抑制现象。
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在 65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
5、绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核，故在提取基因组 DNA 时需去除不含 DNA 的无核红细胞，以免影响白细胞裂解和 DNA 释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为 5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul，体积过小会影响回收效率:洗脱液的 pH 值对洗脱效率也有影响；若需要用水做洗脱液应保证其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 将水的 pH 值调至此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。