原产于中国PH0319 | SDS裂解液 SDS Lysis Buffer

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产品名称 : PH0319 | SDS裂解液 SDS Lysis Buffer
产品品牌 : 飞净 PHYGENE

 

SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
SDS裂解液的主要成分为50mM Tris(pH8.1),1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用我们生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

保存条件: -20℃保存,一年有效。


试剂组分 
SDS Lysis Buffer----100mL----Sotre at -20℃
PMSF(100mM)----1.5mL----Sotre at -20℃【赠送】

注意事项:
1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明:


对于培养细胞样品:

1. 融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。

对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。


3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。


裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP,建议6孔板每孔细胞至少加入200微升裂解液。


对于组织样品:


1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解10分钟。
5. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和ChIP等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

温馨提示:1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。3.实验结果可由多种因素影响,相关处理只限于产品本身,不涉及其他赔偿。

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