PH1085 | 改良番红O-固绿软骨染色液 Modified Safranine O-Fast Green FCF Cartilage Stain Kit

软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。

改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，固绿与胶原纤维结合，不宜褪色，番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

自备材料：10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。

操作步骤(仅供参考)：

1、 标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 常规脱蜡至水。

2、 入新鲜配制的 Weigert 染液染色 3-5min，水洗。

3、 酸性分化液分化 15s。蒸馏水洗5-10min。

4、 滴加固绿染色液内浸染 3-8min。

5、 快速用乙酸溶液洗涤切片 10-15s，以便去除残留的固绿，晾干。

7、 滴加番红Safranin O stain 内浸染3-8min。

7、 按 95%乙醇2-3s、无水乙醇2-5s脱水、无水乙醇1min脱水。

8、二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果

软骨基质>>深红色

软骨细胞核>>蓝色

细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈>>灰绿色

软骨细胞浆>>红色

细胞核>>灰黑色

注意事项

1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。

2、Weigert 染液不可预先配制后放置，配制好后一般 24h 后失去染色力。

3、切片在 Safranin O stain 中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。

4、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。

5、Safranin O stain 染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。

6、95%乙醇脱水时间不宜过长。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。