PH1400 | 蛋白快速银染试剂盒（Protein Fast Silver Stain Kit）

货号 PH1400

规格 20T

常温运输与保存，有效期12个月

试剂组分

自备材料：

1、 水平摇床或侧摆摇床

2、 去离子水(超纯)

3、 乙醇、冰乙酸

产品简介

蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于 2D 凝胶的银染，并可进行后续的质朴检测；3、目的条带清晰；4、不含甲醇。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

使用说明

操作步骤(仅供参考)：

1、 准备工作：以下操作以 8.5×5.5cm、厚度为 1.0mm 的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是 25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在 60～70rpm。【需自行提前配制固定液】 即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4 的比例配制。

【需提前配制洗涤液】，即按无水乙醇:去离子水=1:4 的比例配制。

2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗 2 次，每次 5min。

3、固定：取凝胶放入 50～100ml 固定液中，在摇床上室温摇动 15～20min，重复固定步骤 1 次。固定能够限制蛋白质在胶中移动，并能将胶中的离子和去污剂去除。

4、洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗 2 次，每次 5min。（注意：用上述自行配制的含有乙醇的洗涤液来洗涤，不用去离子水洗涤是为了防止胶缩小，如果胶缩小了，可以用20%-25%乙醇孵育20min使之恢复原来的大小）。

5、水洗：去离子水清洗凝胶 2 次，每次 5min。

6、增敏：配制银染增敏工作液，即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml去离子水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer， 一般应2h内用完。室温下用1×Silver StainSensitizer 孵育凝胶 2min，立即用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 1min。

7、银染：配制银染工作液，即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去离子水中，混匀，即得 1×Silver Stain，一般应 2h 内用完。取凝胶入 1×Silver Stain，在摇床上室温摇动 10～20min。（注意：不要将染液直接倒到胶上，否则会导致背景不均一，应从托盘的角落加入）。

8、水洗：弃液，在摇床上用去离子水清洗凝胶 2 次，每次 30s，摇动速度在 60～70rpm。总的水洗时间应控制在 1.5min 内。（注意：如果冲洗过头会使凝胶中的结合至蛋白质上的银离子脱离，从而导致敏感度下降）。

9、显影：配制银染显影工作液，即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去离子水中，混匀，即 1×Silver Stain Developer，一般应 30min 内用完。清洗凝胶后，立即置于 1×Silver Stain Developer 中，室温孵育 2～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色 30s 后就会出现棕色沉淀，继续显影 2～3min，亦可延长至 5min 以上，如果显影效果不佳，可重新更换 1×Silver Stain Developer 继续显影。

10、迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入银染终止液，摇床上摇动 10min，以终止显色反应。 (配制银染终止液，即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到 90ml 去离子水中，混匀，即 1×Silver Stain Stop Buffer，一般应 24h 内用完。 )

11、保存：弃终止液，加入去离子水 50ml，摇床上摇动 2～5min，弃液。短期保存于新鲜去离子水，长期保存可以制备干胶。

注意事项

1、由于银染非常灵敏，操作时请注意尽量使用高纯度的水，并确保所使用的器皿非常清洁，最好使用洁净的玻璃器皿。操作时必须戴手套，避免皮肤和凝胶直接接触。

2、需自备乙醇、乙酸及纯水或双蒸水。

3、本说明书所指的室温为20-25℃，操作温度较低时由于溶液的扩散能力下降，各步骤需适当延长时间。

4、为了提高银染的敏感度，可以通过延长洗涤的时间来去除固定液中的酸性成分，以降低背景。

5、当样品溶液中有高浓度的还原剂（如β-巯基yi醇）存在时，可能会在凝胶中出现分子质量大小为50～70kDa的条带、条纹或者背景偏黄。

6、银染基本显色液(5X)在低温环境下可能会出现少量沉淀，可在30-50℃水浴中溶解，并充分混匀后使用。至少后续稀释至1X后须确保完全溶解。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题

1、背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分；③凝胶中残留物质未去除干净；④去离子水的纯度过低。

2、蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低；②银染后水洗时间过长；③蛋白量较低；④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。

3、凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分浸没，应加入足量溶液；②容器没有清洗干净；③凝胶接触金属物质；④指纹或其他压迹。