PH0740 | 过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒 （钼酸铵比色法）

Catalog No：PH0740

Size：50T | 100T

有效期：12个月

存储：常温运输，4℃保存！

产品简介

过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。

过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中在最佳酶反应条件下，反应后剩余的H2O2与钼酸铵形成稳定的黄色复合物，其黄色深浅与酶活性成反比，通过分光光度计或酶标仪检测405nm处吸光度。该酶的检测对于研究自由基代谢平衡，抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：

1、 蒸馏水、生理盐水

2、 比色杯

3、 分光光度计

操作步骤(仅供参考)：

1、配制 65mM H2O2 基液：本试剂盒提供的 H2O2 基液中的 H 2O2 浓度约为 1M。由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为 1M 的 H2O2基液用本 CAT Assay buffer 稀释 100 倍，使 H2O2 基液中的 H2O2 浓度约为 10mM。分光光度计测定 A 240 (一般情况下，新配制的 10mM H2O2 基液 A 240 在 0.4~0.45 左右，经过 3 个月以后 A 240 在 0.35~0.4 左右)，H2O2 浓度(mM)=22.94× A 240， 进而计算出本试剂盒提供的 H2O2 基液中的 H2O2 的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制65mM H2O2 基液。

2、配置 MO 显色液：称取 0.4g 钼酸铵试剂加入到 10ml 蒸馏水中，充分溶解即成。MO显色液易出现乳白色样物质，应弃用。尽量现用现配。本产品提供的钼酸铵试剂为过量。

3、准备样品：

①细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用 RIPA 裂解液，如有必要可进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 CAT 的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水 10 倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接测定，不能及时检测可-20℃冻存。

③全血样品：收集适量的全血至一抗凝管内，颠倒混匀，取全血冻融一次，用 CAT Assay buffer 1000 倍后进行 CAT 检测。

④血液中的红细胞裂解液：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少 500μl 全血 4℃ 3000g离心 5min，弃上清，沉淀用预冷的生理盐水洗涤 3 次。用约 5 倍细胞体积的预冷的去离子水，例如 Milli-Q 纯水，重悬细胞沉淀，冰浴 10min。使用前用 CAT Assay buffer 稀释 400 倍后进行 CAT 检测。

⑤植物样品：准确称取植物材料(果肉或者去叶脉的叶片)0.5g，剪碎，置于 4℃预冷的研钵或匀浆器中，加入预冷提取液 1ml，低温研磨至匀浆后转移至离心管，用 3ml 提取液冲洗研钵或匀浆器并转入离心管，加提取液至总体积为 5ml。4℃ 10000r/min 离心20min，上清液为酶提取液，上清液可用于 CAT 的检测。提取液配方：无水磷酸氢二钠3.3g+二水磷酸二氢钠 0.13g，补水至 200ml，完全溶解即为提取液，4℃保存备用。注意：如果 CAT 酶活性较低，应相应减少提取液的总体积，以便提高 CAT 酶的浓度。

⑥高活性样品：如果样品中含有较高活性的 CAT，可以使用 CAT Assay buffer 稀释。

⑦(选做)样品准备完毕后可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的 CAT 含量。

4、CAT 加样：按照下表设置空白管、自身对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管/孔。如果使用分光光度计，反应体系设置如下：

如果使用酶标仪(不推荐)，反应体系设置如下：