PH1963 | AO染色液(1mg/mL)

Acridine Orange 属于三环杂芳香燃料，可以标记 DNA、RNA，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色，因此 AO 常用于细胞内 DNA和 RNA 进行检测。AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为 AO 与 DNA 的结合，其荧光发射峰为 530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的 AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为 AO 与 RNA 的结合，其荧光发射峰为 640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光，因此吖啶橙嵌合到双链 DNA 中显绿色，与单链 DNA 或 RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。


AO 染色液(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用，染色后在荧光显微镜下观察，AO 可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。AO 使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒，而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失；AO 染色常与 EB 染色合用双染，因 EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。 


自备材料：
1、荧光显微镜、低速离心机、细胞计数板、载玻片、盖玻片
2、PBS


操作步骤(仅供参考)：
1、收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用 PBS 清洗细胞 1 次，计数并调节细胞浓度至 106/ml。
2、取适量的细胞悬液，加入 Acridine Orange Stain(1mg/ml)使 AO 终浓度为 8.5～17μg/ml，轻轻混匀。
3、室温避光染色 15～20min，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、荧光显微镜下观察(激发波长 488nm)，计数并拍照。


染色结果：

正常细胞 单链 DNA 或 RNA
细胞被均匀染成黄绿色荧光(发射波长 510~540nm)


凋亡细胞 双链 DNA
染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒(发射波长大于 600nm)


注意事项：
1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂，较少单独使用。
2、吖啶橙染色常与 EB 染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、如有低温离心机进行离心效果更佳。
4、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 


有效期：常温运输，2～8℃避光保存有效期12个月